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第九部分
微生物学和微生物检验之三
弧菌属
霍乱弧菌
呈弧形或逗点状、无芽孢、运动活泼呈穿梭、流星运动、需氧或兼性厌氧、营养要求不高，耐碱（常用ＰＨ８.５的碱性蛋白胨水增菌培养）
患者米泔样粪便涂片呈鱼群状
选择想培养基：硫代硫酸钠－枸橼酸盐－胆盐（ＴＣＢＳ） ～发酵蔗糖产酸，菌落黄色
４号琼脂、庆大霉素琼脂平板 ～ 元素碲（灰褐色菌落）
霍乱弧菌具有耐热的特异性Ｏ抗原和不耐热非特异性Ｈ抗原分为１５５个血清群
Ｏ１群抗原Ａ、Ｂ、Ｃ组合成３个血清型：ＡＢ的小川型
ＡＣ的稻叶型
ＡＢＣ的彦岛型
Ｏ１群有古典生物型（———++—）、EITor型（+/—++——+）
O1群与O群为烈性肠道传染病霍乱病原体；O2~O群引起人类胃肠炎
致病因素：霍乱毒素（CT）不耐热的肠毒素，是目前致泻毒素中最强
鞭毛
菌毛
动力观察：米泔水样粪便制成悬滴片观察动力（有无格兰染色阴性呈鱼群状排列的弧菌）
不能及时接种的粪便标本保存在碱性蛋白胨水中~分离霍乱弧菌
正常胃酸分泌要大量霍乱弧菌才能引发感染~其耐碱不耐酸
副溶血弧菌
营养要求不高，但在培养基中必须加入适量NACI（35g/L）
致病菌株能使人或兔红细胞发生溶血，对马不溶血~称为神奈川现象（鉴定副溶血性弧菌与非致病性的重要指标）
本菌存在于近海岸海水、海产品、及盐泽食品中，是我国沿海最常见食物中毒病原菌
致病性：伤口感染、败血症
检验：氧化酶试验阳性、KIA分解葡萄糖不分解乳糖，H2S阴性、MIU为++—
气单胞菌属与邻单胞菌属
气单胞菌属
G—直杆菌、兼性厌氧、0~40℃均生长(35℃以下嗜冷、10~42℃嗜中)、营养要求不高
多数菌株有β溶血环
在SS和TCBS平板不生长
生化反应：氧化酶和触酶试验阳性、在NACI中不生长、KIA分解葡萄糖产气、H2S阴性
MIU++—
鉴别：与邻单胞和弧菌属鉴别常用O/、TCBS、耐盐试验
氧化酶阳性与肠杆菌科细菌鉴别
致病物质：溶血毒素、细胞毒素。
邻单胞菌属
只有一个：类志贺邻单胞菌，为G—直杆菌，在8~45℃生长
在肠道选择性培养基上形成乳糖不发酵或迟发酵菌落，在血平板上形成不溶血的小菌落
生化反应：氧化酶、触酶试验阳性、硝酸盐还原试验阳性、发酵葡萄糖产酸不产气
弯曲菌属和幽门螺旋杆菌检测
不分解糖类、氧化酶阳性、微需氧、有动力的G—菌、无芽孢
特性：暗视野显微镜下呈投镖、螺旋式运动
微需氧最适生长环境：5%O2、10%CO2、85%N2.
在37℃均可生长，培养基大多含有抗生素。抵抗力弱，但是耐寒
检验：动力~悬滴法；染色检测~格兰和鞭毛染色；
在选择性培养基能生长、氧化酶阳性、格兰染色阴性、弯曲呈S型或螺旋形的细菌初步鉴定为弯曲菌
幽门螺杆菌（HP）
G—、螺旋形、S型弯曲、微需氧菌，在潮湿（相对湿度98%以上）、37℃微需氧下生长良好，营养要求高
生化反应：氧化酶、触酶试验、DNA均阳性，快速脲酶试验强阳性
检测：多采集与胃、十二指肠黏膜部，放入20%葡萄糖运送液或无菌生理盐水立即送检
4℃保存不超过5小时
生化鉴定：触酶、25℃生长等五项试验：+———+
厌氧性急性及检验
专性厌氧~（极度）＜0.5%、暴露10分钟死亡
中度厌氧~氧分压2~8%、暴露60~90分钟
微需氧菌~含5~10%CO2
分为两大类：G+有芽孢的厌氧芽孢梭菌；另一类为无芽孢的球菌和杆菌
厌氧感染：梭状芽孢杆菌以芽孢形式在自然界长期存活，绝大多数厌氧菌存在于人体内的是人体正常菌群。人体皮肤分布最多的为丙酸杆菌属
梭状芽孢杆菌引起外源性感染
无芽孢厌氧菌多数是人体正常菌群，为条件致病菌，一定条件引起内源性感染
厌氧培养最理想的检查材料是组织标本
厌氧菌的分离与鉴定
液体培养基应煮沸10分钟
常用亚甲蓝和刃天青指示厌氧状态(无氧为白色，有氧时刃天青粉红色、亚甲蓝蓝色)
初代培养后必须做耐氧试验
鉴定：卡那霉素~用于梭杆菌（敏感）与类杆菌属（耐药）区分
甲硝唑（灭滴灵）~用于厌氧（敏感）与非厌氧（耐药）的区分
常见厌氧菌
破伤风梭菌~早期为G+,培养48小时芽孢形成后转变为G—,专性厌氧菌
接种于庖肉培养基
意义：主要指标因素是外毒素，对中枢神经系统特殊亲和力，症状为骨骼肌痉挛
产气荚膜梭菌
G+粗大杆菌、产酸产气、能液化明胶
在牛乳培养基中分解乳糖产酸，是络蛋白凝固、同时产生大量气体~汹涌发酵现象
意义：产生外毒素与侵袭性酶。外毒素以a毒素为主（本质为卵磷脂酶）
主要引起气性坏疽、食物中毒
肉毒梭菌
G+杆菌、呈汤匙状或网球拍状、厌氧，对人致死量0.1~1ug
意义：食物中毒~单纯毒性中毒、临床表现很少有胃肠症状，主要是肌肉麻痹
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需氧或兼性厌氧格兰阳性杆菌及检验
常见的有棒状杆菌、芽孢杆菌、李斯特、丹毒、加德纳菌属
棒状杆菌属
白喉棒状杆菌
细长两端膨大的G+杆菌。排列成不规则栅栏状或L、Y、V字形。营养要求高，异染颗粒。
生化反应：触酶试验阳性、分解葡萄糖、麦芽糖、半乳糖、还原硝酸盐；不分解乳糖、不液化明胶、吲哚和脲酶试验阴性
致病性：白喉~急性呼吸道传染病，该病菌存在与带菌者鼻咽腔，致病因素为白喉外毒素
检查：分别作格兰染色和异染颗粒染色~做初步报告
吕氏血清斜面和亚碲酸钾血琼脂发现典型菌落~即报告阳性
需氧芽孢菌属
炭疽芽孢杆菌~致病菌种最大的G+杆菌，两端齐平，呈竹节状，新鲜标本直接涂片可见、无鞭毛、有荚膜~观察芽孢用奥尔特（Olt）染色
有氧条件下形成位于菌体中央但小于菌体的芽孢
在5%CO2环境中菌落由R转变为M型~可见拉丝现象
生化反应：触酶阳性、能分解葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、产酸不产气，不分解乳糖；迟缓液化明胶且形如倒松树状
致病性：人畜共患急性传染病，表现为皮肤炭疽等。皮毛加工工人最容易感染炭疽芽孢杆菌
致病物质：荚膜和炭疽毒素
检验：奥尔特荚膜染色、芽孢染色、重碳酸盐毒力试验：接种于NAHCO3血平板
蜡样芽胞杆菌
引起食物中高度的菌株多有周毛菌、在血琼脂平板呈β溶血、对热抵抗较强
食入10*6~10*8的污染食物可致食物中毒
产单核李斯特菌
G+杆菌、在20~25℃运动活泼、无芽孢。
陈旧培养物多转为G—杆菌
鉴定依据：血琼脂有狭窄溶β血环、在半固体培养呈倒伞形生长、25℃活性最强，可在4℃冷增菌生长、CAMP（与金葡菌协同溶血）和触酶阳性；H2S阴性
丹毒丝属
无鞭毛、无芽孢、无荚膜、触媒阴性的G+杆菌
致病性：红斑丹毒丝菌引起红丹毒丝菌病。接触动物或其产品经皮肤损伤引起类丹毒
分枝杆菌属及检验
呈分支生长的需氧菌
特点：细胞壁含有大量脂类（占干重60%），耐受酸和酒精，能抵抗3%盐酸酒精脱色
结核分支杆菌
抗酸阳性、菌体呈红色；专性需氧，最适宜PH6.5~6.8,；营养要求高
最快分裂速度为18小时一代，固体培养需2~5周可见
液体培养基生长较迅速、形成菌膜，有毒菌株呈索状生长，加乳化剂吐温-80均匀分散生长。
可用热触酶试验区分结核分枝杆菌（阴性）和非典型分枝杆菌（阳性）
烟酸和硝酸盐还原区分人型（+）与牛型（—）
抵抗力强，为无芽孢均能中最耐干燥的细菌，
易发生毒力、耐用性变异（卡介苗是牛型结核毒力变异株，为减活疫苗）
致病性：呼吸道以肺结核多见
致病物质：荚膜、脂质、蛋白质（脂质与毒力有关、磷脂与结核结节形成有关）
索状因子区分结核分枝强毒株与弱毒株
免疫：结核菌素试验~利用4型变态反应监测机体是否感染过结核杆菌
微生物检查：抗酸染色或金胺O荧光染色
标本处理后接种于罗氏培养基，定时观察4~8周
非典型分枝杆菌
除结核杆菌和麻风杆菌以外的分枝杆菌
根据菌落色素和生长速度
麻风杆菌
抗酸染色均匀，常呈束状或团装排列
本菌为典型的胞内寄生菌~存在的细胞呈泡沫状，称为麻风细胞
主要损害：皮肤、黏膜、末梢神经，晚期侵犯深部组织和器官形成肉芽肿
人类是麻风分枝杆菌唯一宿主，也是唯一传染源
主要免疫是细胞免疫
非发酵菌及检验
主要是不发酵、不分解糖类的G—无芽孢需氧杆菌
除不动杆菌、嗜麦芽单胞及个别假单胞外，其余氧化酶试验均为阳性
假单胞菌属
有鞭毛、无芽孢、为专性需氧菌
铜绿假单胞菌
俗称绿脓杆菌，最适合温度35℃、4℃不生长、专性需氧。
在普通培养基长成圆形大小不一、边缘不整齐、扁平、光滑、湿润菌落
血平板上形成扁平、湿润灰（蓝）绿色菌落、周围有透明溶血环；
经肉汤培养，液面可形成菌膜，上层为蓝绿色；产生可溶于水和氯仿的蓝绿色无荧光绿脓素及溶于水而不容于氯仿的绿色荧光素。
对干燥、紫外线有抵抗力，但对热抵抗力弱
生化反应：氧化酶阳性、不产生吲哚、不产生H2S，液化明胶、分解尿素、还原硝酸盐
引起的感染见于烧伤和创伤后，严重者引起败血症。
具有多重耐药，最大剂量应用青霉素、头孢他啶和氨基糖苷类抗生素联合治疗
其他假单胞菌~如嗜麦芽，为条件致病菌，治疗首选磺胺类，对亚胺培南天然耐药
不动杆菌属
无芽孢、无鞭毛、专性需氧。
三阴：氧化酶、硝酸盐还原、动力试验阴性
医院感染
产碱杆菌属
周毛菌
氧化酶、触酶均阳性；不分解醣类、不分解尿素、不产生H2S、不产生吲哚、不液化明胶
条件致病菌，常医院感染。
选用喹诺酮类药物治疗
军团菌属
无芽孢、无荚膜、有鞭毛的需氧菌、在含有2.5~5%CO2中生长良好
初次分离需含L-半胱氨酸的BYCE培养基，含铁盐可促进生长。
触酶阳性、部分氧化酶阳性、不分解醣类。
医院空调冷却水常用此菌
军团病主要由嗜肺军团菌引起，重症室以肺部感染为主要特征，治疗以大环内酯类加利福平。
通过空气传播，患者吸入污染气溶胶随上皮细胞进入巨噬细胞和中性粒细胞繁殖致病。
其他革兰阳性杆菌检验
小细菌是指无动力、无芽孢、菌体小、对营养要求苛刻的小杆菌
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